PCR實驗室又叫基因擴增實驗室,由于PCR檢測因其高靈敏度、快速、操作方便等優勢已經被廣泛應用,不過正是由于它靈敏度*,極微量的污染源都有可能導致檢測結果的假陽性,因此,如何避免以及處理實驗室污染,對PCR人來說是一門必修課。
一、樣本間交叉污染:
主要是在采(?。拥倪^程中,由于取樣工具之間的交叉造成污染;或者在核酸提取的過程中,由于移液器、離心管等使用不當導致的污染。
二、PCR試劑的污染:
主要是在PCR試劑配制過程中,由于移液器、容器、陰性對照及其它試劑被核酸模板或陽性對照污染。
三、克隆質粒的污染:
在PCR實驗室操作中經常會用到陽性參考品,這些陽性參考品大多數是由某些克隆質粒制作而成,克隆質粒在單位容積內濃度高,不小心使用很容易造成污染。
四、PCR擴增產物污染
這是PCR反應中主要常見的污染問題。因為PCR產物拷貝量大,遠遠高于PCR檢測數個拷貝的極限,所以極微量的PCR產物污染,就可造成假陽性結果。還有一種容易忽視,可能造成PCR產物污染的形式是氣溶膠污染,在空氣與液體面摩擦時就可形成氣溶膠,據計算一個氣溶膠顆??珊?.8萬拷貝,因而由其造成的污染是一個值得特別重視的問題。
污染消除判斷標準:
設計陰性對照組,根據陰性對照確認污染情況??墒褂贸ㄩ_后隔夜放置操作區的陰性對照進行實驗(在單獨的PCR實驗室驗證),若連續三天陰性對照沒有起跳,則說明污染得到控制,可恢復正常實驗。